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日立超速離心機售后維修,超速密度梯度離心法

超速密度梯度離心是一種離心分離技術,它基于樣品中不同成分的密度差異,利用制備的稠密的介質溶液在離心管內形成連續或不連續的密度梯度。當樣品在高速旋轉的離心機中受到離心力作用時,不同密度的成分會沉降到不同位置,從而實現分離。

在超速密度梯度離心中,常用的介質包括氯化銫、蔗糖和多聚蔗糖等。這些介質的主要作用是形成密度梯度,并通過防止液體介質對流混合來確保分離后的各區帶不會損壞。

要實現超速密度梯度離心,超速離心機是必不可少的。Eppendorf 目前提供落地款 CP-NX 系列超速離心機和 CS(F)NX 微型超速離心機,均可用于實現高效的密度梯度離心實驗,助力優質產物純化。

超速密度梯度離心法可分為“速率區帶離心法”和“等密度梯度離心法”兩種。

速率區帶離心是指顆粒在離心力的作用下,以不同的速度向管底沉降,最終形成區帶的方法,其分離的方法學原理主要基于樣本和雜質之間的大小和形狀差異;等密度梯度離心法則是利用離心力和浮力達到平衡的原理,使顆粒在與其密度相等的介質中達到等密度區帶,其依據的分離方法學原理是樣本和雜質之間密度的差異。

▲速率區帶離心(左)和等密度梯度離心(右)

比如大家所熟知的“DNA半保留復制”,便是通過等密度梯度離心法被發現的。

1958年,美國科學家Matthew Meselson和Franklin Stahl進行了一項關鍵性的實驗。首先,他們利用含15N的NH4Cl作為唯一碳源的培養基來培養大腸埃希菌,使其DNA分子中富含15N同位素。經過連續培養若干代后,大腸埃希菌的DNA就被充分標記了15N。
然后,科學家們將這些標記了15N的大腸埃希菌轉移到普通培養基(含14N氮源)中繼續培養。在復制過程中,新合成的DNA鏈會包含14N,而原始鏈則保留15N。
培養完畢進行等密度梯度離心,由于不同密度的DNA分子被同位素進行了標記,因此會根據其密度的差異在梯度介質中沉降到不同的位置。

由于DNA半保留復制的特性,新合成的DNA分子會包含一條原始鏈和一條新合成的鏈,

因此,子一代的DNA分子將是一條15N鏈和一條14N鏈的雜合分子,密度介于純15N-DNA和純14N-DNA之間。

這樣的復制第一代與完全由新鏈組成的DNA分子(第二代)在密度上會有所不同。因此,在等密度梯度離心后,這些不同密度的DNA分子會在離心管中形成不同的區帶。

這種方法的成功應用,不僅證實了DNA的半保留復制方式,也為后續的DNA復制機制研究提供了重要的實驗基礎。

整體而言,密度梯度離心法廣泛應用于生物化學、分子生物學、細胞生物學等領域,可以分離和純化細胞、病毒、蛋白質、核酸等生物大分子。

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